載體蛋白KLH, BSA, OVA偶聯(lián)-多肽修飾

肽-載體蛋白偶聯(lián)多用于制備抗多肽類(lèi)抗體，單獨(dú)的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應(yīng)，而帶有很多抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細(xì)胞，進(jìn)一步誘導(dǎo)B細(xì)胞免疫反應(yīng)。

請(qǐng)記住，免疫系統(tǒng)是將肽-蛋白作為一個(gè)整體來(lái)激起免疫反應(yīng)的，因而產(chǎn)生的抗體中有針對(duì)多肽的，有針對(duì)鏈接劑的，也有針對(duì)載體蛋白的。 其中最常見(jiàn)的載體蛋白有如下幾種:

• KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血藍(lán)蛋白，是在某些軟體動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物(蜘蛛和甲殼蟲(chóng))的血淋巴中發(fā)現(xiàn)的一種游離的藍(lán)色呼吸色素。血藍(lán)蛋白含兩個(gè)直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類(lèi)似，它易于氧結(jié)合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結(jié)合的銅蛋白，氧化時(shí)呈青綠色，還原時(shí)呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是最常被選用的載體蛋白。



• BSA (Bovine Serum Albumin)，即牛血清白蛋白，屬于最穩(wěn)定的和可溶的白蛋白。其分子量為67 x 103 Da （含有59個(gè)Lys）。大約有30-35個(gè)主要氨基可用于與鏈接劑發(fā)生共軛反應(yīng), 使得BSA成為一種很流行的弱抗原化合物載體蛋白。
  BSA的不利之處在于在很多實(shí)驗(yàn)中，它被當(dāng)作封閉劑使用，如果多肽-BSA偶聯(lián)物的抗血清用于這樣的檢測(cè)分析中，通常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，因?yàn)檫@些血清含有抗BSA的抗體。



• OVA (Ovalbumin)，即雞卵白蛋白，分子量為45 x 103 Da。它可作為第二載體蛋白去驗(yàn)證抗體是否特異性地只針對(duì)多肽而并非載體蛋白(如BSA)。

巰基修飾(通過(guò)Cys的側(cè)鏈)用于與KLH、BSA或OVA發(fā)生共軛反應(yīng)

所有攜帶巰基反應(yīng)的功能基團(tuán)經(jīng)修飾都可被用來(lái)發(fā)生共軛反應(yīng)。其中最常見(jiàn)的有以下幾種:

• 碘乙酰胺（Iodoacetamide）
• 馬來(lái)酰亞胺（Maleimide）
• 烷基鹵（Alkyl halide）



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